分光光度法測定蝦青素

引言

建立一種快速測定化學(xué)合成蝦青素含量的分光光度分析方法。采用經(jīng)氫醌處理的三氯甲烷做為提取溶液，在489nm 波長下測定吸光度，該分光光度法的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸系數(shù)是0.9999 ，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為 0.36% ，加標(biāo)回收率為99.8%~102.5% ，表明該分析方法準(zhǔn)確性高、重復(fù)性好，且簡便、快速，可以作為企業(yè)大批量生產(chǎn)中蝦青素的測定方法。

蝦青素是一種廣泛存在于生物體的非維生素A源類胡蘿卜素。 在水生動物蝦、蟹、魚和鳥類的羽毛中發(fā)揮調(diào)節(jié)色素沉積并顯色的作用。 蝦青素被廣泛應(yīng)用于魚蝦等水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的飼料添加劑，以補充人體內(nèi)蝦青素的缺乏。 蝦青素是類胡蘿卜素合成的最高級別產(chǎn)物，具有明顯的抗氧化、消除活性單線態(tài)氧的作用。 因此在食品、化妝品、保健品領(lǐng)域也有著廣泛的應(yīng)用前景。從動植物及菌類中提取的蝦青素，由于其蝦青素含量較低及檢測限值低的原因，基本采用液相色譜分析法。 而目前市場上魚飼料中的蝦青素90% 是化學(xué)合成得到， 國內(nèi)尚未見有系統(tǒng)的對化工合成的蝦青素含量檢測的研究報道。 本文研究參考國外對蝦青素理化性質(zhì)的報道，采用紫外分光光度法對化學(xué)合成蝦青素的含量進(jìn)行檢測，結(jié)果滿意可行。

實驗原理

      蝦青素是由四個異戊二烯單位以共軛雙鍵形式鏈接，兩端又有兩個異戊二烯單位組成六節(jié)環(huán)結(jié)構(gòu)的化合物，蝦青素分子結(jié)構(gòu)中的這種共軛雙鍵體系及離域化的π電子，在可見光區(qū)表現(xiàn)出強吸收帶，且每種類胡蘿卜素分子的最大吸收峰位置與紫外可見光光譜的精細(xì)結(jié)構(gòu)都是具有特征性的。 由于類胡蘿卜素分子的這種光吸收性質(zhì)，溶液中的類胡蘿卜素一般服從 beer-lambert定律，所以通過分光光度法可以實現(xiàn)對蝦青素精確的定量分析。

實驗儀器

紫外分光光度計

電子天平

超聲波清洗器

恒溫水浴裝置

離心機(jī)

氮氣吹干

石英比色皿

試劑

BHT （ 2,6- 二叔丁基 -4- 甲基苯酚）

三氯甲烷

二氯甲烷

碳酸氫鈉

氫醌

硫代硫酸鈉

三氯甲烷處理方法：分別稱取0.1 g碳酸氫鈉、硫代硫酸鈉、氫醌和BHT置于500mL 的棕色容量瓶， 加入三氯甲烷至刻度，搖勻超聲 30 min 后過濾待用。

試驗溶液：準(zhǔn)確稱取蝦青素樣品 40mg （準(zhǔn)確至 0.0002g ），置于 250mL 的棕色容量瓶， 加入10mg BHT ，加入50mL 二氯甲烷溶解， 在熱水浴中超聲5min ，流水冷卻至室溫； 再加入100mL 三氯甲烷繼續(xù)超聲5min 溶解，冷卻至室溫，然后用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，即為待測溶液。

實驗方法

工作曲線的繪制

精密稱取待測蝦青素溶液適量，用三氯甲烷溶劑溶解， 配置成濃度為 1.0μg/mL、2.0 μg/mL 、3.0μg/mL、4.0μg/mL、 5.0μg/mL、6.0μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液， 用 UV-1500 紫外分光光度計測定不同波長下的吸光度。 在最大波長下，以三氯甲烷試劑空白調(diào)零，測定吸光度。 以蝦青素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)吸光度值為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸、繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

實驗步驟

準(zhǔn)確移取待測溶液 A 1.0mL于50mL 棕色容量瓶中， 用處理過的三氯甲烷 （三氯甲烷加0.02% 氫醌振搖后過濾）稀釋至刻度，搖勻，得溶液 B。準(zhǔn)確移取試驗溶液 1.0 mL 于 50 mL 棕色容量瓶中，用處理后的三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻。用紫外—可見光分光光度計測定溶液 B 在波長 489 nm 處的吸光度（ 1cm石英比色皿）。 以處理后的三氯甲烷為空白對照。

儀器參數(shù)

UV-1500PC紫外可見分光光度計

儀器特點

*采用單片微機(jī)控制，128*64位液晶顯示

*寬大的液晶顯示器可顯示多組數(shù)據(jù)

*巨大的內(nèi)存空間，可存儲多組數(shù)據(jù)和曲線

*自動調(diào)0、調(diào)100%功能

*波長自動調(diào)節(jié)

*光源自動切換，濾色片自動切換

*寬大樣品池（5mm～100mm）

*具有最多十點標(biāo)樣建標(biāo)準(zhǔn)曲線測量功能

*可通過直接輸入K、B因子建立標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量測量

*可直接輸入標(biāo)樣和對應(yīng)濃度值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量測量

*可斷電保存測量設(shè)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)

*配備通用并行打印接口，可打印標(biāo)題欄、測量數(shù)據(jù)、曲線參數(shù)、曲線標(biāo)準(zhǔn)樣品點和曲線

*配USB接口

*可通過PC軟件控制實現(xiàn)光譜掃描等更精確和靈活的測量要求

技術(shù)指標(biāo)及基本參數(shù)

*波長范圍： 190～1100nm

*光譜帶寬： 2nm

*波長準(zhǔn)確度：±0.5nm

*波長重現(xiàn)性：≤0.2nm

*透射比準(zhǔn)確度: ±0.3% τ

*透射比重復(fù)性：0.15% τ

*雜散光：≤0.05% τ (220nm NaI，340nm NaNO2)

*穩(wěn)定性： 0.001A/h（500nm預(yù)熱后）

*測光方式：透過率、吸光度、濃度、能量

*波長調(diào)節(jié)：自動調(diào)節(jié)

*光度范圍： -0.3～3A

*顯示方式： 128*64液晶

*檢測器：進(jìn)口硅光二極管

*光源：進(jìn)口氘燈，進(jìn)口鎢燈

*電源： AC 220V/50Hz或110V/60Hz

*功率： 120W

*儀器尺寸：480×350×220mm

*主機(jī)凈重： 15Kg

關(guān)于我們
上海美析儀器公司簡介

上海美析儀器有限公司(以下簡稱美析)，是一家具有自主知識產(chǎn)權(quán)的高新技術(shù)企業(yè)，美析的創(chuàng)業(yè)理念“科技——因你改變”，并以此為企業(yè)宗旨，不斷探究、果敢創(chuàng)新。特別是在分析測試儀器領(lǐng)域，不斷開發(fā)出先進(jìn)的產(chǎn)品，使美析成為優(yōu)質(zhì)儀器資源的供應(yīng)者。

美析主營光譜類儀器可見分光光度計、紫外可見分光光度計、原子吸收光譜儀、超微量分光光度計、原子熒光光度計、ICP 電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀、ICP 電感耦合等離子體質(zhì)譜儀，目前，我們的產(chǎn)品已廣泛應(yīng)用于有機(jī)化學(xué)、無機(jī)化學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)藥、環(huán)保、冶金、石油、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。同時美析利用在產(chǎn)品機(jī)械結(jié)構(gòu)、光學(xué)設(shè)計、電氣應(yīng)用和軟件開發(fā)方面積累的豐富經(jīng)驗，結(jié)合市場的最新實際需求，近期將陸續(xù)推出一批全新的分析類儀器。美析的總部及生產(chǎn)基地設(shè)在上海，營銷中心設(shè)在北京，并在江蘇、上海、山東三地建有研發(fā)基地。為充分利用各地的智力資源，美析與國內(nèi)外的部分科研單位也進(jìn)行了深層次的科研合作，不斷將科研成果轉(zhuǎn)化為生產(chǎn)力。為更好的服務(wù)于廣大客戶，美析儀器國內(nèi)設(shè)有 12家辦事機(jī)構(gòu)，度身定制符合您需求的應(yīng)用解決方案，提高產(chǎn)品的附加值。在不斷服務(wù)國內(nèi)用戶的同時，美析也與 20 多個國家的分銷機(jī)構(gòu)建立了深度的戰(zhàn)略合作關(guān)系。

及國內(nèi)多項資質(zhì)審查認(rèn)證，并有著多項自行研發(fā)的光譜類專利版權(quán)等等）