紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定贛南風(fēng)車(chē)子中總黃酮的含量

風(fēng)車(chē)子（Combretum alfredii hance）為使君子科風(fēng)車(chē)子屬植物，別名水番桃、清涼樹(shù)、華風(fēng)車(chē)子、四角風(fēng)，分布于江西、湖南、廣東、廣西等地 。風(fēng)車(chē)子屬植物的根、莖、葉、花和種子均可入藥，在不同地區(qū)被當(dāng)作民間藥廣泛用于治療肝炎、痢疾、呼吸道感染甚至癌癥?，F(xiàn)代藥理研究表明該屬植物具有保肝、抗炎、殺菌、抗癌和抗艾滋病等作用 ，其化學(xué)成分主要以二苯乙烯類(lèi)、三萜化合物及菲類(lèi)化合物為主，此外還有大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、黃酮類(lèi)、脂肪酸類(lèi)、生物堿類(lèi)和甾體類(lèi)化合物等。

黃酮類(lèi)成分可能是風(fēng)車(chē)子屬植物的主要藥效成分之一，但目前對(duì)風(fēng)車(chē)子黃酮類(lèi)化合物的研究相對(duì)較少，本論文擬用紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定風(fēng)車(chē)子中總黃酮的含量，建立風(fēng)車(chē)子總黃酮含量比色測(cè)定的方法，為風(fēng)車(chē)子的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用奠定理論基礎(chǔ)。

儀器與試劑

高速萬(wàn)能粉碎機(jī)，

十萬(wàn)分之一電子天平，

數(shù)控超聲波清洗器，

紫外 - 可見(jiàn)分光光度計(jì)（UV1500，上海美析儀器有限公司），

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，

超純水系統(tǒng)。

蘆丁對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào) ：100080-201610），

 超 純 水（自制 ），

乙 醇、NaNO2、Al(NO3)3、NaOH 等試劑均為分析純。

風(fēng)車(chē)子（市售）經(jīng)贛南醫(yī)學(xué)院彭金年副教授鑒定為使君子科風(fēng)車(chē)子屬植物風(fēng)車(chē)子（Combretum alfredii hance）。

方法與結(jié)果

對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)取105 ℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品20 mg，用60 % 乙醇溶解定容至100 mL，配制成0.2 mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液。

供試品溶液制備

將風(fēng)車(chē)子60 ℃烘干，用高速萬(wàn)能粉碎機(jī)粉碎，過(guò)40目藥篩。精密稱(chēng)取1.000 g，置于250 mL 圓底燒瓶中，加入60% 乙醇后，置于超聲波清洗機(jī)中進(jìn)行提?。弦罕?span>1:34，提取時(shí)間60分鐘 ），抽濾，濾渣同法再提取2次，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至適量，轉(zhuǎn)移至50 mL 容量瓶，以60% 的乙醇定容至刻度，得風(fēng)車(chē)子供試品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)繪制

精密吸取蘆丁對(duì)照品溶液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10 mL，分別置于50 mL 容量瓶中，各加60% 乙醇溶液至12 mL，分別加入5% 亞硝酸鈉溶液2 mL，搖勻，放置6 min，加入10% 硝酸鋁溶液2 mL，搖勻后放置6 min，加入 4% 氫氧化鈉溶液 20 mL，搖勻后放置5 min，加60% 乙醇溶液至刻度，搖勻后放置15 min。

測(cè)量波長(zhǎng)的確定 ：以未加蘆丁對(duì)照品溶液的第1瓶溶液作空白，對(duì)加入8.0 mL 蘆丁對(duì)照品溶液的第5瓶溶液在350~600 nm 范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描，得蘆丁對(duì)照品顯色后的吸收曲線(xiàn) ；同法對(duì)風(fēng)車(chē)子供試品溶液適量顯色處理后掃描，得到風(fēng)車(chē)子樣品顯色后的吸收曲線(xiàn)，結(jié)果見(jiàn)圖1。對(duì)比蘆丁對(duì)照品和風(fēng)車(chē)子樣品的吸收曲線(xiàn)，選擇508 nm 為定量測(cè)量波長(zhǎng) 。

以未加蘆丁對(duì)照品溶液的第1瓶溶液作空白，在定量波長(zhǎng)508nm處測(cè)定各溶液的吸光度，以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，線(xiàn)性擬合得回歸方程

y=8.652x-8.524E^-4（R²=0.9986），線(xiàn)性范圍0.008~0.040 mg/mL，見(jiàn)圖2。

風(fēng)車(chē)子總黃酮含量測(cè)定

取風(fēng)車(chē)子供試品溶液0.5 mL，置于50 mL容量瓶中，依 2.3 項(xiàng)下方法依次加入顯色劑，在508 nm 測(cè)定其吸光度，重復(fù)測(cè)定3次，以吸光度平均值根據(jù)回歸方程計(jì)算風(fēng)車(chē)子黃酮含量。

結(jié)論與討論

風(fēng)車(chē)子中黃酮類(lèi)化合物經(jīng)超聲提取、硝酸鋁顯色后，可用紫外 - 可見(jiàn)分光光度法在508 nm 下定量測(cè)定。線(xiàn)性擬合得回歸方程 y=8.652x-8.524E^-4（R²=0.9986），線(xiàn)性范圍0.008~0.040 mg/mL，測(cè)得贛南風(fēng)車(chē)子中黃酮含量為（58.42±0.19）mg/g(n=3)，該方法操作簡(jiǎn)便、快捷、高效、結(jié)果準(zhǔn)確、精密度和穩(wěn)定性好，雜質(zhì)干擾少。風(fēng)車(chē)子是江西贛南地區(qū)的特色中藥材之一，開(kāi)發(fā)利用風(fēng)車(chē)子對(duì)促進(jìn)贛南特色中藥材發(fā)展具有一定的意義，本文建立了超聲提取、紫外 - 可見(jiàn)分光光度法測(cè)定風(fēng)車(chē)子總黃酮含量的測(cè)定方法，可為開(kāi)發(fā)利用贛南風(fēng)車(chē)子總黃酮提供定量分析方法。

儀器參數(shù)

UV-1500PC紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)

儀器特點(diǎn)

*采用單片微機(jī)控制，128*64位液晶顯示

*寬大的液晶顯示器可顯示多組數(shù)據(jù)

*巨大的內(nèi)存空間，可存儲(chǔ)多組數(shù)據(jù)和曲線(xiàn)

*自動(dòng)調(diào)0、調(diào)100%功能

*波長(zhǎng)自動(dòng)調(diào)節(jié)

*光源自動(dòng)切換，濾色片自動(dòng)切換

*寬大樣品池（5mm～100mm）

*具有最多十點(diǎn)標(biāo)樣建標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)測(cè)量功能

*可通過(guò)直接輸入K、B因子建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行定量測(cè)量

*可直接輸入標(biāo)樣和對(duì)應(yīng)濃度值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行定量測(cè)量

*可斷電保存測(cè)量設(shè)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)參數(shù)

*配備通用并行打印接口，可打印標(biāo)題欄、測(cè)量數(shù)據(jù)、曲線(xiàn)參數(shù)、曲線(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)樣品點(diǎn)和曲線(xiàn)

*配USB接口

*可通過(guò)PC軟件控制實(shí)現(xiàn)光譜掃描等更精確和靈活的測(cè)量要求

技術(shù)指標(biāo)及基本參數(shù)

*波長(zhǎng)范圍： 190～1100nm

*光譜帶寬： 2nm

*波長(zhǎng)準(zhǔn)確度：±0.5nm

*波長(zhǎng)重現(xiàn)性：≤0.2nm

*透射比準(zhǔn)確度: ±0.3% τ

*透射比重復(fù)性：0.15% τ

*雜散光：≤0.05% τ (220nm NaI，340nm NaNO2)

*穩(wěn)定性： 0.001A/h（500nm預(yù)熱后）

*測(cè)光方式：透過(guò)率、吸光度、濃度、能量

*波長(zhǎng)調(diào)節(jié)：自動(dòng)調(diào)節(jié)

*光度范圍： -0.3～3A

*顯示方式： 128*64液晶

*檢測(cè)器：進(jìn)口硅光二極管

*光源：進(jìn)口氘燈，進(jìn)口鎢燈

*電源： AC 220V/50Hz或110V/60Hz

*功率： 120W

*儀器尺寸：480×350×220mm

*主機(jī)凈重： 15Kg

關(guān)于我們

上海美析儀器公司簡(jiǎn)介

上海美析儀器有限公司(以下簡(jiǎn)稱(chēng)美析)，是一家具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的高新技術(shù)企業(yè)，美析的創(chuàng)業(yè)理念“科技——因你改變”，并以此為企業(yè)宗旨，不斷探究、果敢創(chuàng)新。特別是在分析測(cè)試儀器領(lǐng)域，不斷開(kāi)發(fā)出先進(jìn)的產(chǎn)品，使美析成為優(yōu)質(zhì)儀器資源的供應(yīng)者。